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A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞+EGFP

A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞+EGFP

货号: K-h008
价格:
3200.00
生长状态: 0
规格: T25/瓶
品牌: KNE/科耐尔
英文名称: A375+EGFP
产品名称: 人恶性黑色素瘤细胞+EGFP
鉴定: 提供A375细胞鉴定报告
培养体系: DMEM+10%FBS+1%丙酮酸钠+1%L-谷氨酰胺+1%P/S
产品详情

人恶性黑色素瘤细胞

A375+ EGFP

细胞介绍

A375源自一位54岁女性,是Giard DJ等人建立的一系列细胞株中的一株。该细胞可在免疫抑制小鼠上成瘤,在琼脂上形成克隆。

A375-EGFP是在 A375细胞上用慢病毒标记上EGFP,可以显示绿色荧光,带有嘌呤霉素抗性。

细胞特性

  • 来源:人黑色素瘤
  • 形态上皮细胞,贴壁生长
  • 含量:>1x106 细胞数
  • 规格:T25或者1mL冻存管包装
  • 5)用途:仅供科研使用。


    细胞筛选:

    该细胞为稳定转染EGFP的细胞,随细胞传代次数的增加,其EGFP荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。

    建议收到细胞后至少传3代,冻存留种后再进行筛选。

    初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为1ug/ml嘌呤霉素的完全培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含2ug/ml嘌呤霉素的完全培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为5ug/ml。若筛选过程中,漂浮细胞大于60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药完全培养基正常培养。


    运输和保存:干冰运输及复苏好存活细胞11mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2T25瓶复苏的存活细胞常温发货,到后按照细胞接收后的处理方法操作。

  • 细胞接收后的处理:
  • 1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

    2)请在45X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

    3贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

  • 4备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶12传代
  • 培养基培养冻存条件准备:

  • 1准备 DMEM基础培养基(推荐K-0001 87 %
  • 优质胎牛血清 10 %
  • GlutaMAX-1谷氨酰胺 ( K-0900 ) 1%

    Sodium Pyruvate丙酮酸钠 ( K-01100 ) 1% P/S青霉素-链霉素 1%

  • 2培养条件 气相:空气,95%;二氧化碳,5% 温度:37摄氏度培养箱湿度为70%-80%
  • 3冻存液90%血清10%DMSO现用

  • 细胞处理
  • 冻存细胞的复苏::

    将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  • 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养
  • 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

    弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

    加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培养瓶中T251-2mLT752-3mL置于37培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml10%FBS的培养基来终止消化

    轻轻打匀后吸出,在1000RPM件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行

    细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例;

    细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

    1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

    将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。


    注意事项:

    1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

    2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

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