人正常结肠上皮细胞（有限细胞系）

(CCD841 CON)

细胞介绍

CCD 841 CoN (ATCC CRL-1790) 细胞是拉伸的上皮样细胞，在培养中生长为扁平且杂乱无章的层。可以观察到一些圆形细胞堆积在附着的群体上，碎片中等至重。CRL-1790 是一种正常的人类二倍体细胞系，因此它最终会衰老。人口倍增水平 (PDL) 信息可在特定批次的分析证书上找到，并可在 ATCC 网站上找到。

细胞特性：

1​ 来源：女性 大肠

2​ 形态：上皮细胞样，贴壁生长(贴壁弱，消化时间短，时间过长会导致细胞不长)

3​ 含量：>1x106 细胞数

4​ 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5​ 用途：仅供科研使用。

运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

一．培养基及培养冻存条件准备：

准备DMEM 基础培养基 (K-0001)，特级胎牛血清10 % P/S 1%

1​ 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。换液频率：隔天换液。

2​ 冻存液：90%FBS，10%DMSO，现用现配。

注意：

1.细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，1000rpm(约150g)离心3-5min，弃上清。加5ml PBS重悬细胞，再1000rpm(约150g)离心3-5min，用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。

2.细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。

细胞生长缓慢时，可以选择更换优质胎牛血清或者提高血清浓度（最高不超过20%）培养，也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。

2​ 细胞处理：

1​ 冻存细胞的复苏：：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2​ 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，置于37℃培养箱中消化1分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，轻敲几下可以下来为准，严禁消化到细胞完全漂浮，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

21000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。