人乳腺癌/阿霉素耐药细胞
（MCF-7/Adr）
细胞介绍
MCF-7/Adr为由MCF-7细胞构建的耐Adr药物细胞株。
细胞特性
|
1）来源：人乳腺癌细胞耐药筛选
|
2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
|
|
3）含量：>1×106 细胞数
|
4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
|
|
5）用途：仅供科研使用。
|
|
细胞运输、保存及注意事项
|
|
复苏细胞
|
冻存细胞
|
|
包装
|
充液的T25细胞培养瓶
|
1mL冻存管
|
|
运输条件
|
常温
|
干冰
|
|
保存方式
|
37℃恒温细胞培养箱
|
-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮
或立即复苏
|
|
※注意事项
|
收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞有污染；或冻存管有破损，融化、漏液等，请立即拍照并联系我们。照片包括细胞培养瓶/冻存管外观，显微镜下细胞照片（100倍，200倍各2张）；
若收到的复苏细胞有少量细胞脱落、飘起，可能由于运输途中导致。请先于37℃恒温细胞培养箱中静置2~3h后，再进行处理；
复苏细胞的充液培养基为不含药物的维持培养基，血清浓度较低，收到细胞后请及时更换为完全培养基；
建议收到细胞后，首先进行扩增（至少3代），并冻存部分细胞以备用。
初次培养，当细胞汇合度达约80%时，可加入400ng/mL ADR的完全培养基培养至细胞完全融合后传代。细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至500ng/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的完全培养基培养，至细胞汇合度达80%左右，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。
细胞冻存过程中，不可添加药物。
|
细胞培养试剂的配制
ADR药物的配制及保存
建议将ADR药物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR药物，使其完全溶解后，使用0.22um滤器过滤除菌。
注意：可根据用量配置药物，并将药物分装保存，避免反复冻融导致药物失效。溶解后的Taxol，4℃保存1周，-20℃保存1个月，-80℃保存6个月。
冻存液的配制
90%优质胎牛血清+10%DMSO，现用现配。（冻存液中不含药物）
完全培养基的配制（推荐使用K-h253-001b）
|
成分
|
体积/浓度
|
|
优质胎牛血清
|
10%
|
|
双抗
|
1%
|
|
500ng/mL ADR
|
0.05%母液（1mg/mL）
|
|
RPMI-1640培养基
|
补充至所需体积
|
细胞培养条件
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%~80%。
细胞处理
1）冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
注意：①细胞复苏过程中，不可使用含有药物的培养基。须在细胞生长至汇合度达80%左右时，方可添加400ng/mL ADR药物；若细胞生长状态较为缓慢，可适当降低ADR的浓度（首次降低一半药物浓度），或使用不含药物的完全培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的ADR浓度。
②建议复苏细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸，造成人员伤害。
2）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）
①待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养。
②弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次，吸净残余的PBS。
③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化2~5min，显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落，即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台，加入2倍体积的、含10%FBS的培养基中止消化。
④将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min离心5min，弃去上清液。
⑤向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞，轻吹混匀。将细胞悬液按1：1的比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中，添加6~8mL完全培养基。
注意：细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至500ng/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首次降低一半药物浓度）或使用不含药物的完全培养基培养，至细胞汇合度约80%，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。
3）细胞冻存
①细胞冻存时，步骤同2）细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
注意：细胞冻存过程中，不可添加药物。
②将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
